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  1. 您好,歡迎來到新賽美
    分子生物學系列產品

    總RNA柱式提取試劑盒

    貨號:
    M5102
    規格:
    100T
    目錄價:
    ¥799.00
    購買數量
    + -
    TRnaZol RNA Kit (離心柱型)
    總 RNA 柱式提取試劑盒
    貨號:Cat.No: M5102 Size:100 Preps

    產品介紹

    TRnaZol RNA Kit 是一種快速高效的總RNA柱式 提取試劑盒。通過對產品的多重優化,提高了裂解液的效果 和增強了提取的靈敏度,獲得純度更好,質量更高的總RNA。每個吸附柱可處理高達 50mg 組織,或 5X106 細胞 。在優化的試劑中加入了RNA 保護劑,防止RNA 在操作過程中發生降解,使用RNA Extraction Buffer替代 氯仿,純化的RNA 可用于 Northern Blot,Dot Blot,PolyA 篩選,體外翻譯,RNase 保護分析和分子克隆。


    產品特色

    ? 安全性高:使用RNA Extraction Buffer替代氯仿
    ?  產量高:最大程度地獲得樣品中的 RNA
    ?  純度高:DNA和蛋白質污染含量低,適用于各種下游實驗
    ?  操作快速:簡化操作步驟,快速完成RNA純化 


    操作步驟

    準備試劑(自備):無水乙醇等
    1. 各種材料樣本的勻漿處理
    (a)貼壁培養的細胞:吸去培養基,在培養板中直接加入適量的 TRnaZol Reagent(每 10cm
    2
    生長的培養細胞中 加入 1ml 的TRnaZol Reagent),水平放置片刻,便于裂解液均勻分布細胞表面裂解,再使用移液器吹打細胞并移至 收集管中。
    注意:(1)收集細胞數量不要超過 5X10
    6
    /ml TRnaZol Reagent; (2)TRnaZol Reagent加入量根據培養板面積確定,若是TRnaZol Reagent 加入量不足, 可能導致提取的 RNA 中有 DNA 污染。
    (b)懸浮培養細胞:將懸浮培養的細胞和培養基一起移入離心管中,離心收集細胞,每 5X10
    6
    動植物、酵母或 細菌細胞加入TRnaZol Reagent。
    注意(1)部分酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理;或者需要使用溶菌酶進行裂解處理。 (2)加入 TRnaZol Reagent 前不要洗滌細胞,以免 RNA 降解。
    (c) 動物、植物組織:取新鮮或-70℃冷凍的動植物組織在液氮中充分剪碎研磨,將研磨成粉狀的樣品轉移至離心管 中,每 20-50mg 組織加入 1ml TRnaZol Reagent,勻漿儀進行勻漿處理。
    注意:(1)要在液氮等低溫下處理樣品組織,避免 RNA 降解;
    (2)樣品體積一般不要超過 TRnaZol Reagent 體積的10%。
    2. 樣品在加入 TRnaZol Reagent 后用移液器反復吹打幾次,直至裂解液中無明顯沉淀,使樣品充分裂解。室溫靜置 5min,使得蛋白質核酸復合物完全分離
    注意可選步驟 4-25℃,12,000rpm 離心 5 min,取上清,轉入一個新的 RNase-Free 的離心管中。(如果樣品中含有較 多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結節部分等,可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細胞外膜、多糖、高分子 量 DNA,RNA 存在于上清溶液)。
    3. 向上述溶液中加入RNA Extraction Buffer,每使用 1ml TRnaZol Reagent加入 0.2ml RNA Extraction Buffer,劇烈振 蕩 15sec。
    4. 12,000g, 4-25℃離心 10 min,此時樣品會分為三層:紅色有機相、中間層和上層無色水相。其中 RNA 主要在 水相中,將水相(約 500ul)轉移至一個新的 RNase-Free 的離心管中。 5. 在得到的無色水相 的離心管中,加入等體積的無水乙醇,混勻。將得到溶液 轉入吸附柱NcmSpin Column 中,4-25℃ 12,000g離心30sec,若一次不能將全部溶液和混合物加入吸附柱NcmSpin Column,分兩次轉入吸附柱 NcmSpin Column 中,4-25℃,12,000g 離心 30sec,棄掉收集管中的廢液。 6.向吸附柱 NcmSpin Column 中加入 500ul 漂洗液RWB(使用前請先檢查是否已加入指定體積無水乙醇), 12,000g 離心 30sec,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱 NcmSpin Column 放入收集管中。 7. 重復操作步驟 6。 8. 將吸附柱NcmSpin Column 放入收集管中,12,000g 離心2min,盡量除去漂洗液。將吸附柱置于室溫放置2min,徹 底晾干
    注意此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,如果有漂洗液殘留,可能會影響后續的 RT-PCR 等實驗操作。
    9. 加入 30-50ul 的洗脫液 REB Elution Buffer (或者Rnase-Free Water),室溫靜置 2min,4-25℃,12,000g 離心 1min。樣品保存于-70℃以備長期使用。 


    產品組分及保存條件

    成分組分.jpg


    注意事項

    1. 預防 RNase污染,如使用無 RNase 的塑料制品和槍頭,操作時要戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。
    2. 加入RNA Extraction Buffer后,一定要充分振蕩,保證RNA 提取的效果。
    3. 使用的樣本避免反復凍融,以免影響RNA 的產率和質量。
    4. TRnaZol Reagent 含有苯酚,具有毒性和腐蝕性,使用本制品時要穿戴防護物品,避免吸入體內、接觸皮膚、吞 食等現象發生。如果不小心發生,應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。
    5. 在漂洗液 RWB Wash Buffer 中加入指定量的無水乙醇(分析純),在試劑瓶上標注出,使用完畢后要擰緊試劑瓶 ,防止乙醇揮發。


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